本发明公开了一种生物墨水及其制备方法，所述墨水包括A组分和B组分，所述A组分为活性凝胶微球和活体细胞的共混溶液，所述活性凝胶微球包括两亲性多乙烯基大分子单体和巯基化天然高分子；所述B组分为大分子交联剂，所述大分子交联剂为巯基功能化大分子交联剂。本发明的生物墨水中活性水凝胶微球表面含有大量的双键官能团，大分子交联剂分子骨架上含有大量巯基功能团，将A和B两组分混合时，大分子交联剂的巯基可以和微球表面的双键在生理条件发生迈克尔加成反应，得到包埋有活体细胞的颗粒凝胶材料。本发明制备的生物墨水的成分无毒，且对细胞损伤小，交联固化不引入额外的引发剂等毒性组分，不需要紫外、高温等刺激性固化方式，并且最终打印支架的孔隙可调，适宜于活体细胞的增长、分化和迁移。