本申请提供了一种双标记石墨烯场效应晶体管的制备方法及其在miRNA检测中的应用。本申请的双标记石墨烯场效应晶体管中对GFET的表面进行双链特异性核酸酶(DSN)和DNA探针的双标记修饰，将DSN酶固定在GFET表面，使DSN周围铺有DNA探针，同时每个DNA探针都在DSN的空间水解范围内。利用双标记的GFET快速测定miRNA的浓度时，向GFET的反应池中加入待测miRNA，其与DSN附近的DNA结合形成异源互补双链后，DSN可迅速水解DNA探针并释放miRNA，释放的miRNA可再次与其它DNA探针结合并引起DNA探针不断水解，进而引起电信号的变化。