本发明涉及一种现场快速检测食源性致病菌副溶血性弧菌的方法、试剂盒及其应用，属于食源性致病菌检测技术领域。本发明以无细胞合成技术为基础，制备简单、反应条件温和的体外转录体系，该体系以能够特异性识别副溶血性弧菌的适配体为控制元件，调控下游荧光基因的表达，产生绿色荧光。本发明所述方法具有制备简单、可快速现场检测、成本低、响应速度快的优势，利用适配体特异性识别副溶血性弧菌的特性，具有灵敏度高和特异性强的特点，实现了对副溶血性弧菌的现场快速检测。