本发明公开了基于核酸构象引发链取代驱动DNA Walker的双信号检测食源性致病菌的方法，特点是包括将DNA Walker摆臂链溶液和含待测食源性致病菌适配体的保护探针溶液等体积混合后反应后缓慢降至室温，形成受保护的DNA Walker链溶液的步骤；将氨基化四氧化三铁和戊二醛混合，在室温下搅拌，磁清洗后悬浮于寡核苷酸贮存液中，再加入已充分混匀的Walker链溶液和发夹底物链混合液反应，磁洗涤后用寡核苷酸贮存液定容后与待测溶液、取代链溶液和内切酶溶液混合孵育，取上清液进行荧光检测沉淀滴加在磁性玻碳电极上进行电化学发光检测，优点是高灵敏度、高选择性以及操作简单快速。