本发明涉及醋酸去氨加压素的纯化方法，主要解决现有技术分离得到醋酸去氨加压素纯度较低、收率较低、理化性质相近的杂质难去除的技术问题。该方法将粗肽溶于纯化水溶液，然后利用十八烷基硅烷键合硅胶填料为固定相，在待纯化样品中加入氢氧化钠，然后进行纯化，得到了高纯度高质量高收率的醋酸去氨加压素原料药。本发明方法在高效液相法纯化醋酸去氨加压素的过程中，向醋酸去氨加压素溶液样品中添加氢氧化钠，选用十八烷基硅烷键合硅胶填料与磷酸盐流动相相结合的色谱梯度洗脱除去与醋酸去氨加压素理化性质相近的杂质，可一次收到纯度为99.0％以上，收率80.0％的样品；提高了醋酸去氨加压素成品的纯度和收率。