本发明属于细胞生物学技术领域，提出了一种多能干细胞诱导为神经祖细胞培养扩增方法及其应用，包括如下步骤：S1:使用预冷枪头将Matrigel吸取，加入至预冷的Advanced DMEM/F12培养基稀释，制成Matrigel包被液，并将Matrigel包被液预冷；S2:将预冷Matrigel包被液转移至培养皿中，并放置于培养箱中静置，得Matrigel包被培养皿；S3:将融合度达到70‑80％的NPC细胞，使用PBS洗涤，再使用Accutase消化酶进行消化；S4:将离心管中的细胞离心去上清，采用NPC维持培养基并加入ROCK inhibitor重悬NPC细胞后接种于Matrigel包被培养皿中进行培养；S5:1天后吸弃Matrigel包被培养皿中液体，并观察NPC细胞形态。本发明神经祖细胞来源于诱导人多能干细胞的定向分化，具有人源神经祖细胞的形态和特征，并且实现了该细胞的长期维持培养。