本发明公开了一种体外药物代谢实时检测方法，包括如下步骤：将未经前处理的含大黄素的代谢体系溶液稀释后作为检测溶液，以亲脂胶束‑纳米均孔膜修饰的ITO电极作为工作电极，铂电极和银/氯化银电极分别作为对电极和参比电极，采用电化学方法，将待测溶液搅拌富集后，实现对代谢体系中的大黄素的快速、灵敏检测。本发明使用的亲脂胶束‑纳米均孔膜修饰电极集选择性富集和电化学检测功能于一体，检测的灵敏度高，检测限低；同时工作电极制备简单，无需对样品进行复杂的前处理，通过二氧化硅纳米孔道的尺寸选择性，即可实现代谢体系中其他成分存在下对大黄素的快速筛分和定量检测。