本发明提供了一种胃蛋白酶原I检测试剂盒、检测方法；其中，试剂盒包括：试剂一，用于阻断补体干扰；所述试剂一包括抗人补体干扰的抗体和乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸盐类物质；试剂二，用于捕捉胃蛋白酶原I；所述试剂二包括单抗‑微球复合物；其中，所述单抗‑微球复合物由胃蛋白酶原Ⅰ单克隆抗体和微球交联得到。本发明提供的试剂盒具有抗补体干扰能力强、特异性好、灵敏度高和线性范围宽的优点，可以同时满足临床对胃蛋白酶原I低值和异常高值样本检测的要求。