本发明公开了一种用于磷酸化肽的富集材料制备方法及应用，首先采用分子对接、计算机模拟的方法，针对待富集的特异性磷酸化多肽，考虑模板化合物对pH值、温度的稳定性，印迹聚合物形成时间和空间立体结构等因素的影响，虚拟合成磷酸化肽富集分子印迹材料，以此选择最佳的模版化合物；以选择出具有特异性磷酸化蛋白、肽模板化合物作为模板，甲基丙烯酸为功能单体，应用分子印记技术结合微波辅助合成方法，制备与模板化合物所对应的分子印迹纳米颗粒、磁性分子印记纳米颗粒；将制备的磷酸化肽的富集纳米材料，用于血清样品中的特异性磷酸化蛋白、肽的富集提取，并将其应用于质谱法定性、定量检测血清中的特异性的特异性磷酸化蛋白、肽中。