本发明提供了一种游离睾酮的高灵敏检测方法，用于定量检测人体内游离睾酮的浓度，属于分子检测技术领域，解决了体内低浓度游离睾酮难于定量检测的技术难题；其技术方案为：包括以下步骤：1)检测基底制备：以微孔板为载体，通过光子晶体模板，制备得到反蛋白石结构光子晶体作为检测的基底；2)靶标检测：依次向微孔中加入样本和SERS纳米标签，通过测试检测基底上标签的拉曼特征峰强度，计算得出游离睾酮的浓度。本发明的有益效果为：本发明的游离睾酮的检测方法集合了反蛋白石结构光子晶体的高比表面积和SERS纳米标签的高灵敏检测的优势，满足了痕量游离睾酮检测的需求。