一种具有协同作用的抗肿瘤药物组合物、纳米制剂及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域，具体涉及一种阳离子药物阿贝西利和米托蒽醌形成的药物组合物、纳米制剂及其制备方法和应用。所述的纳米制剂由阿贝西利、米托蒽醌和聚阴离子材料按照比例自组装形成。该药物组合物通过药物间的协同作用减少单一药物的用量，达到1+1>2的效果。该纳米制剂能显著地在肿瘤部位累积，逆转免疫抑制微环境，降低毒副作用并提高药物疗效。此外，纳米制剂中的药物具有协同抗转移的功能，为临床肿瘤患者的治疗提供新的策略。