本发明提出了一种从三分三植物中分离纯化红古豆碱的方法，涉及化学工艺领域。一种从三分三植物中分离纯化红古豆碱的方法，其包括如下步骤：将三分三植物浸膏进行一级萃取并浓缩，得到总生物碱，然后对总生物碱进行二级萃取并浓缩，得到粗品，对粗品进行结晶过滤，得到粗品盐，再对粗品盐进行三级萃取，得到成品。通过将三分三植物制成浸膏，去除大部分杂质，然后再对三分三植物浸膏进行多级萃取，逐级将三分三中所含有的红古豆碱分离提取出来，得到高纯度的红古豆碱成品；该方法提取效果好，分离效率高，整个方法流程简单，更有利于生产使用。