本发明提供了一种氰乙酸乙酯‑二氢喹啉酮衍生物的荧光探针及其制备方法和应用，在水溶液中检测亚硫酸氢根荧光探针，其中所述氰乙酸乙酯‑二氢喹啉酮衍生物的化学结构式如下：；制备方法为：将N‑乙基吗啉二氢喹啉酮‑3‑甲醛和氰乙酸乙酯溶解于有机溶剂中所得溶液滴加冰醋酸作催化剂，然后在常温下搅拌反应；所得溶液减压抽滤，所得固体残渣用乙醇清洗，再用乙醇重结晶，得到氰乙酸乙酯‑二氢喹啉酮衍生物荧光探针。本发明的氰乙酸乙酯‑二氢喹啉酮衍生物荧光探针在近乎纯水相生理条件下能选择性的与亚硫酸氢根作用，溶液绿色荧光变为蓝色荧光，特别是作为荧光探针在细胞溶酶体内亚硫酸氢根的方便检测的应用。