本发明提供了一种苯并吲哚啉‑二氢喹啉酮衍生物荧光探针及其制备方法和应用，其中苯并吲哚啉‑二氢喹啉酮衍生物的化学结构式如下：；制备方法为：将N‑吗啉乙基二氢喹啉酮‑3‑甲醛和N‑甲基苯并吲哚啉碘盐溶解于有机溶剂中；所得溶液滴加冰醋酸作催化剂，然后进行回流搅拌反应；反应所得溶液减压抽滤，所得固体残渣用乙醇清洗，再用乙醇重结晶，得到苯并吲哚啉‑二氢喹啉酮衍生物荧光探针。本发明的苯并吲哚啉‑二氢喹啉酮衍生物荧光探针能选择性的与亚硫酸氢根作用，溶液橙色荧光变为蓝色荧光，特别是作为荧光探针在细胞溶酶体内亚硫酸氢根的方便检测中的应用。