本发明公开一种刺激响应型聚两性离子纳米凝胶的制备方法与应用，通过由透明质酸或其衍生物、类似物修饰双键后与带正电药物形成复合物，或者由聚乙烯亚胺修饰双键后与带负电的药物形成复合物，再通过双键与一端带有双键结构的两性离子、两端带有双键结构的响应型交联剂通过原位自由基聚合的方式形成聚两性离子纳米凝胶，得到包覆蛋白多肽类药物或核酸类药物的聚两性离子纳米笼。该纳米凝胶具有优异的抗污性能，能够抵抗非特异性生物大分子的吸附，显著延长血液循环时间，可在肿瘤特定刺激下发生裂解，实现治疗药物的靶向递送。该载体具有生物相容性好、载药率高、肿瘤部位高效富集以及药物可控释放等特点，达到高效治疗肿瘤的目的。