本发明涉及一种细菌分离菌液稀释装置，有效的解决了目前菌液稀释人工效率低；解决的技术方案包括包括储液腔和混液腔，储液腔位于混液腔上方，混液腔内装有一个用于排液的第一虹吸管，第一虹吸管的内端高于混液腔内底面固定距离，储液腔内安装有第二虹吸管，第二虹吸管的虹吸触发后可向混液腔内注入定量稀释液，还包括虹吸效应定时触发装置，用于按设定好的时间间隔和顺序触发两个虹吸管的虹吸效应，从而实现混液腔的排液和稀释剂的注入，对混液腔内的菌液进行多次稀释；本发明通过两个虹吸管和两个腔室，自动完成菌液的逐渐稀释工作，提高了工作效率。