本发明公开了一种查尔酮的溶酶体荧光探针及其制备方法与应用，本发明属于有机分子荧光探针技术领域，将2’‑羟基查尔酮HCA和1,3‑二溴丙烷加入有机溶剂中反应，经硅胶柱色谱分离获得中间体Br‑HCA，将中间体Br‑HCA和吗啉加入有机溶剂中反应，经硅胶柱色谱分离获得溶酶体荧光探针Lyso‑HCA。该荧光探针制备方法简单、快速、成本低，制得的荧光探针背景干扰低、检测灵敏度高，应用于细胞荧光成像的激发能力强，该探针荧光对酸碱性环境稳定性好，对溶酶体荧光成像的特异性好。该探针为细胞溶酶体荧光成像研究提供了具有广阔应用前景的工具。