本发明公开了硫霉素制备和分离方法，包括一下步骤：准备需要的D‑对甲飙基苯丝氨酸乙酯、甲醇溶剂、钾硼氢、酸中和液、二氯乙腈和盐酸材料，将D‑对甲飙基苯丝氨酸乙酯倒入甲醇溶剂中，再加入钾硼氢进行反应，收回甲醇，将第一步反应中得到的溶液用酸中和液进行中和，调节溶液PH值，再加入二氯乙腈，减压回收甲醇，回收的甲醇至干加入盐酸水解，水解后的固体混合物进行分离，得到硫霉素。本发明所公开的硫霉素制备和分离方法，硫霉素的制备效率高，有效的降低了硫霉素的制备成本，提高了经济效益，利用本发明方法进行硫霉素的制备，使硫霉素的制备更加高效经济。