鲟科鱼类卵黄磷蛋白的制备方法及其应用，它涉及用于鉴别鲟科鱼类雌雄的卵黄磷蛋白的制备方法及通过使用卵黄磷蛋白鉴别鲟科鱼类雌雄的方法。鉴于国内还没有建立使用鲟科鱼类卵黄磷蛋白来检测鲟科鱼类卵黄蛋白原的免疫学方法，国外只建立少数鲟科鱼类的酶联免疫法，本发明按照下述步骤进行制备：一、取鲟科鱼类的卵，低温高速匀浆和低温离心后，经饱和硫酸铵沉淀，凝胶柱分离纯化，透析除盐后，制备卵黄磷蛋白冻干粉；二、称取冻干粉，溶于生理盐水中，加入弗氏佐剂乳化，免疫大白兔，制备多克隆抗体，它可以用于鉴别鲟科鱼类雌雄。本发明具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、成本低等优点。