一种测定乳果糖、甘露醇和乳糖含量的试剂盒，包括盒体以及盒盖，其特征在于：盒体中置有一可以固定试管的固定物，该固定物上至少置有二个可以搁置试管并加以固定的孔，该孔中置有装有试剂的试管。本实用新型将盒内的试剂管和样品管配套使用，采用液相色谱质谱联用仪进行定量测定样品中乳果糖、甘露醇和乳糖的含量，提供了一种操作简便、专一灵敏的，并与测定乳果糖、甘露醇和乳糖含量的定量检测方法配套的试剂盒，以改进现有甘露醇和乳果糖浓度检测方法，能满足大规模临床研究的需要。