一种人Epo基因在牛β-casein基因座上定位整合的基...
授权
摘要
本发明公开了一种CRISPR/Cas9介导的人Epo基因在牛β‑casein基因座上定位整合的基因打靶方法。该方法包括，从人肾脏中提取得总RNA，PCR扩增牛β‑casein基因第二外显子上游1062bp片段及其下游1065bp片段分别被插入到骨架载体neo基因的上游和下游作为打把载体的5'同源臂和3'同源臂，将人EPO cDNA插入到5’同源臂下游，构建以neo基因作为正筛选因子的人EPO cDNA基因在牛β‑casein基因座定位整合的打把载体，基于打靶位点序列，设计并构建特异性断裂靶位点序列的CRISPR/Cas9表达载体，采用电击转染法将打把载体和CRISPR/Cas9表达载体共转染到牛胎儿成纤维细胞中，获得人Epo基因在牛β‑casein基因座上定位整合的基因打靶牛胎儿成纤维细胞。
基本信息
专利标题 ：
一种人Epo基因在牛β-casein基因座上定位整合的基因打靶方法
专利标题（英）：
暂无
公开（公告）号 ：
CN109266678A
申请号 ：
CN201811160145.2
公开（公告）日 ：
2019-01-25
申请日 ：
2018-09-30
授权号 ：
CN109266678B
授权日 ：
2022-05-17
发明人 ：
张学明王雅楠丁海麦
申请人 ：
张学明
申请人地址 ：
内蒙古自治区包头市青山区迎宾小区5栋1号
代理机构 ：
重庆乐泰知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人 ：
付金星
优先权 ：
CN201811160145.2
主分类号 ：
C12N15/85
IPC分类号 ：
C12N15/85 C12N15/90 C12N5/10 C07K14/505
IPC结构图谱
C
C部——化学；冶金
C12
生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程
C12N
微生物或酶；其组合物；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基。
C12N15/00
突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体或其分离、制备或纯化；所使用的宿主
C12N15/09
DNA重组技术
C12N15/63
使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节
C12N15/79
专门适用于真核细胞宿主的载体或表达系统
C12N15/85
用于动物细胞
法律状态
2022-05-17 ：
授权
2019-02-26 ：
实质审查的生效
IPC(主分类) : C12N 15/85
申请日 : 20180930
申请日 : 20180930
2019-01-25 ：
公开
注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
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1、
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