本发明提供一种白树药材中α‑高野尻霉素的含量检测方法。该方法包括：配制对照品溶液：精密称定α‑高野尻霉素对照品，加入溶剂溶解并配制成所需浓度的对照品溶液；配制供试品溶液：取待测白树药材粉末，加入提取溶剂进行提取，离心后取上清液，定容，得到供试品溶液；含量测定：通过液相色谱‑串联质谱法，测定对照品溶液以及供试品溶液中α‑高野尻霉素的峰面积，根据外标法计算白树药材中α‑高野尻霉素的含量。本发明采用液相色谱‑串联质谱法，首次实现了多羟基生物碱类物质α‑高野尻霉素与其4个手性异构体的拆分，实现了对α‑高野尻霉素的直接定性、定量分析，具有良好的系统适用性、稳定性、重复性和重现性。