本申请公开了一种旋转阀、液路系统和核酸序列测定系统。旋转阀被构造成在第一阀位置和第二阀位置之间转动，旋转阀设有公共端口、多个第一端口、多个第二端口和多个连通槽，连通槽可选择地连通公共端口和第一端口或者第一端口和第二端口；在旋转阀处于第一阀位置的情况下，第一端口与第二端口通过连通槽连通，形成有第一流道，在旋转阀处于第二阀位置的情况下，第一端口与公共端口通过连通槽连通，形成有第二流道。如此，应用该旋转阀于包含多条液路/流路的液路系统，能够实现对该些多条液路的独立或并行地三通控制，可以避免液路系统中同时设置多个三通阀，从而使得液路系统紧凑、制备成本降低。