本发明的一种主流条件下厌氧氨氧化生物膜培养方法，属于生活污水生物处理技术领域。本发明在主流条件下，先培养挂膜速度快的好氧异养生物膜，通过改变环境使好氧异养生物膜驯化为缺氧异养生物膜，进一步培养出缺氧自养的厌氧氨氧化生物膜。本发明的培养方法总共耗时约206天，大大加快了厌氧氨氧化生物膜的培养速度，缩短了反应器的启动时间；本发明在启动时仅需一次性接种少量厌氧氨氧化污泥，厌氧氨氧化接种污泥稀缺和昂贵，因此能大大降低运行成本；本发明处理的污水是污水处理厂的初沉池出水或二沉池出水，外加少量氨氮和亚硝氮，并非实验室条件下配置的生活污水，也无需投加其他化学药剂，操作维护简单，易于工程应用和推广。