本发明公开了一种基于帧的时隙ALOHA协议的射频识别系统防重放方法，主要包括电子产品码(EPC)序列提取和EPC序列搜索两个部分。所采用的技术方案为：在多标签的射频识别系统中，将一轮标签识别中所有标签的EPC读取顺序进行提取，得到的EPC序列被处理得到哈希EPC后存储在哈希树中。一旦在一次新的射频识别会话中提取的哈希EPC被发现已经存在于哈希树中，该次新的射频识别会话将被认为是重放攻击并拒绝该次新会话。与现有的射频系统的防重放方法相比，本发明无需特意设计随机噪音序列，直接使用基于帧的时隙ALOHA的协议自带的随机性来防御重放攻击，不会改变任何原始信号，不会因为外部环境变化对信号的扭曲而导致接收的反向散射信号无法解码，可以部署应用在任意多标签的射频识别系统中。