本发明建立一种基于Cas13a和中介物介导的双级联循环激活无扩增快速检测RNA方法，属于生物检测技术领域。设计优选Cas13a反式剪切中介物发夹结构及产物对应引导CrRNA。靶RNA识别并结合Cas13a/RNA1复合物，激活Cas13a高效反式剪切中介物发夹结构生成含脚趾的产物双链RNA2为次级靶；次级靶RNA2识别并激活Cas13a/RNA2复合物，循环剪切中介物发夹结构并累积激活Cas13a，累积活性Cas13a最终剪切报告RNA，由此实现双级联循环激活Cas13a无扩增快速检测RNA。该方法快速、简单、特异性及灵敏度良好，且所设计中介物及对应引导CrRNA组合，对不同疾病相关RNA及病毒RNA通用。所建立方法和试剂盒可用于生物样本中疾病相关微量RNA及微量病毒RNA的快速检测。