本发明实施例公开了一种基于人眼视频的瞳孔轨迹生成方法，包括步骤1：对各帧图像进行粗滤波，进行第一次形态学滤波，消除红外光照射在瞳孔处形成的白斑；步骤2：计算各帧图像的最小灰度平均值，根据最小灰度平均值判断是否为有效帧，若是则取阈值；步骤3：进行二值化处理；步骤4：再进行第二次形态学滤波，去除眉毛、皮肤色素小区域，并填充二值化后的瞳孔区域；步骤5：使用拉普拉斯算子进行边缘检测，得到瞳孔的轮廓；步骤6：计算瞳孔下极点。本发明能够有效处理A>S×10%的帧，而不可处理的基本为闭眼或瞳孔模糊不清的情况；本发明可以生成更稳定、更准确的眼球运动轨迹。