本发明涉及来曲唑检测的技术领域，尤其涉及一种高效液相色谱‑串联质谱检测人血浆中来曲唑的方法，具体包括将样本进行蛋白沉淀后，依次进行涡旋振荡、离心分离，取上清液，进行高效液相色谱‑串联质谱的检测。本发明采用蛋白沉淀法对血浆样本进行前处理，其步骤简单，内源性杂质峰的干扰作用小，无需液液萃取后进行氮吹并重新溶解的步骤。通过高效液相色谱‑串联质谱法，进行梯度分离，在3.5分钟内完成检测，具有分离度好、专一性强的优点，并且节约检测时间。本发明的方法的灵敏度高，血样样本中来曲唑的线性范围为0.5000ng/mL~250.0ng/mL。通过对方法学评价试验，表明本发明的检测方法具有准确度、精密度和选择性好、无明显基质效应的优点。