本发明公开了一种纳米纤维素基荧光银纳米簇及其制备方法与应用。该制备方法包括如下步骤：(1)将纳米纤维素进行羧基化改性处理，得到含有羧基的氧化纳米纤维素；然后再进一步进行醛基化处理，得到富含羧基和醛基的氧化纳米纤维素；(2)以富含羧基和醛基的氧化纳米纤维素为还原剂和稳定剂，银氨溶液为银源，再添加保护剂，在常温条件下搅拌反应，得到纳米纤维素基荧光银纳米簇。本发明中制得的纳米纤维素基荧光银纳米簇具有良好的发光性能、抗菌性能和防霉性能，可广泛应用于化学分析、生物医疗、环境监测等领域。