本发明提供了一种利用秸秆厌氧发酵制备甲烷的方法，涉及甲烷制备技术领域，所述方法包括以下步骤：将第一菌种以15‑18％的接种量于第一玉米秸秆培养基上进行扩繁培养，得到第一菌液；将第二菌种以15‑18％的接种量于第二玉米秸秆培养基上进行扩繁培养，得到第二菌液；将玉米秸秆、无机盐以及水混匀，得到第一混合液；向所述第一混合液中加入质量份数16‑20份的所述第一菌液，在32‑35℃温度下培养2.5‑3.5d后，加入质量份数8‑10份的所述第二菌液，继续培养7.5‑8.5d，得到第二混合液；向所述第二混合液中添加接种物，混匀后进行厌氧发酵，获得甲烷。本发明条件温和，易于控制，能够提高甲烷产量，且成本低。