一种副溶血弧菌基因高效敲除质粒的构建方法
公开
摘要
本发明公开了一种副溶血弧菌基因高效敲除质粒的构建方法，属于分子生物学和生物技术领域。本发明优化了敲除过程，引入Cre/loxP系统。在敲除同源臂之间加入了带有loxP位点的庆大霉素抗性片段，后该抗性片段通过Cre酶去除。第二次同源重组时加入庆大霉素，只有正确进行同源重组的菌株可以存活于10％蔗糖庆大抗性平板上，以此提高敲除菌株的筛选效率。再进行第二次结合转导，将带有cre基因的pOTC质粒导入副溶血弧菌。cre基因在细胞中表达Cre酶，识别loxP位点，并去除loxL与loxR之间的基因片段，即去除庆大抗性片段，在含有10％蔗糖的试管中去除pOTC质粒，本发明的方法提高正确菌株的筛选效率。
基本信息
专利标题 ：
一种副溶血弧菌基因高效敲除质粒的构建方法
专利标题（英）：
暂无
公开（公告）号 ：
CN114606254A
申请号 ：
CN202210235371.2
公开（公告）日 ：
2022-06-10
申请日 ：
2022-03-11
授权号 ：
暂无
授权日 ：
暂无
发明人 ：
王小元孟祥宇王建莉檀昕周晴黄丹阳季帆
申请人 ：
江南大学
申请人地址 ：
江苏省无锡市滨湖区锦溪大道99号江南大学国家大学科技园
代理机构 ：
哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司
代理人 ：
赵巧娜
优先权 ：
CN202210235371.2
主分类号 ：
C12N15/74
IPC分类号 ：
C12N15/74 C12N15/31 C12N1/21 C12R1/63
IPC结构图谱
C
C部——化学；冶金
C12
生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程
C12N
微生物或酶；其组合物；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基。
C12N15/00
突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体或其分离、制备或纯化；所使用的宿主
C12N15/09
DNA重组技术
C12N15/63
使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节
C12N15/74
专门适用于大肠杆菌以外之原核细胞宿主的载体或表达系统
法律状态
2022-06-10 ：
公开
注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
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