本发明公开了一种用于培养Vero细胞的无血清培养基及其制备方法，包括基础培养基，所述基础培养基包括葡萄糖和谷氨酰胺，还包括主要添加因子和次要添加因子，所述主要添加因子包括蛋白质类、激素、生长因子、促贴壁因子、微量元素和维生素，所述次要添加因子包括还原剂、胰蛋白酶抑制剂和剪切力保护剂。本发明中，通过本发明提供的培养基培养Vero细胞，不仅能维持Vero细胞的正常生长，还能提供Vero细胞的扩增效率，有利于加快新冠病毒疫苗的研发和生产，其次，培养基化学成分明确，不需要血清，成本低廉，避免了因使用血清带来的生物安全风险，有利于提高生物制品生产工艺和成品质量的稳定性。