本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种无血清培养基及其制备方法和应用。所述无血清培养基由添加成份和基础培养基组成，所述添加成份包括营养因子、生长因子、辅助因子和抑制细胞凋亡因子中的至少一种。本发明提供的无血清培养基所有成分明确，无动物来源，对人体无毒副作用；该无血清培养基可较好维持毛囊细胞、皮肤角质细胞的活性，存活率达90％左右，增殖能力极佳；本发明的无血清培养基可提供人体毛囊体外生长所需的所有物质，可维持离体毛囊活性一周以上，可维持干细胞再生来源毛囊的活性长达140天以上；采用本发明的无血清培养基培养的毛囊在移植后，可直接生长，避免毛囊进入休止期。