本发明提供了一种双歧杆菌发酵溶胞产物、制备方法及其应用，属于化妆品技术领域。其中，双歧杆菌发酵溶胞产物，包括：长双歧杆菌、动物双歧杆菌和青春双歧杆菌进行混合发酵的发酵液经离心得到的滤液，以及所述长双歧杆菌、动物双歧杆菌和青春双歧杆菌进行混合发酵的菌体经酶解得到的溶胞物母液。本发明菌体酶解所得溶胞物母液和发酵滤液的结合能够最大限度地降低可溶性小分子在产品生产过程中的损失，作为化妆品原料保证多糖、多肽的浓度适合用于皮肤吸收及护理，甚至可以直接涂抹于皮肤表面使用。