本发明涉及一种多糖硫酸酯的制备方法。猪苓多糖硫酸酯的制备方法，其特征是：包括如下步骤：1).制备酯化试剂；2).按猪苓多糖粉末∶无水甲酰胺或二甲基甲酰胺的质量比＝0.4－2.0∶36－48选取，将猪苓多糖粉末悬浮于无水甲酰胺或二甲基甲酰胺中，得猪苓多糖悬浮液；3).进行酯化反应：按酯化试剂∶猪苓多糖悬浮液中的无水甲酰胺或二甲基甲酰胺的体积比＝27.5－75∶40选取酯化试剂，将猪苓多糖悬浮液缓慢加入酯化试剂中，于100℃的水浴下搅拌反应2－4小时，冷至室温，加冰水，用NaOH中和到pH值为6－8；4).沉淀：用无水乙醇沉淀，收集沉淀物；5).纯化；6).再沉淀，对沉淀物冷冻干燥，得猪苓多糖硫酸酯。本发明得到的猪苓多糖硫酸酯具有生物活性强的特点。