本实用新型公开一种定位机构及激光切割机，定位机构包括顶出组件和限位件，所述顶出组件包括顶杆和驱动气缸，所述驱动气缸固定装设于机床上，所述顶杆与驱动气缸的伸缩端固定连接，所述限位件固定装设于工作台上，所述限位件呈U形，包括主体部和两限位部，所述主体部和两限位部围绕形成限位槽。激光切割机包括机床、工作台和如上所述的定位机构，所述定位机构为多个，多个定位机构中的顶出组件两两相对设置于机床的两侧，多个限位件两两相对设置于工作台的两侧，所述顶杆在驱动气缸的驱动下同时伸出插入限位件的限位槽中实现对工作台定位。本实用新型能对工作台进行精准定位，有效提高激光切割机的切割精度，提高激光切割机的切割质量。