本发明公开了一种以多羟基醇作为分子伴侣协同高效制备蛋白基纳米乳液的方法及制得的蛋白基纳米乳液。该方法包括：蛋白溶于多羟基醇的溶液中，混匀，得到蛋白质分散液，与油相混合均质得到粗乳液，乳化后得到蛋白基纳米乳液。该方法利用了多羟基化合物能作为酶或其他功能蛋白的活性保护剂的功能特性，将蛋白质与多羟基醇预混，有效地保护了蛋白质在后续高能乳化过程中的原有构象，与油相混合后经高压均质即可获得粒径均一且稳定良好的纳米级水包油型乳液。本发明提供的蛋白基纳米乳液用料简单，且为食品级，不仅可以通过便捷的均质手段直接获得，而且对油相具有优异的保护或控释效果，因而在日化产品、食品、药品等领域具有广阔的应用前景。