本发明涉及污水生物处理技术领域，尤其涉及一种耦合菌群生物膜的制备方法。本发明包括：载体的生物改性；间歇运行形成缓慢生长菌群初始生物膜；连续运行加固缓慢生长菌群生物膜；间歇运行附加快速生长菌群初始生物量；连续运行强化耦合菌群生物膜。本方法基于水处理系统中功能微生物生长特性，通过对载体生物改性、系统间歇及连续运行有机结合的方式，充分发挥了各功能菌群的优势并弥补了其在生物膜形成过程中的短板，建立了高效、稳定的污水生物脱氮系统，解决了多菌群耦合的污水生物脱氮系统启动慢、稳定性差的问题。本方法简单方便，易于实现。