本发明提供了一种熔解曲线重叠峰的分离方法、装置和电子设备，涉及PCR检测的技术领域，包括：首先基于常规方法获取PCR反应板各孔熔解曲线的熔点峰位置，利用Savitzky‑Golay求导方法确定各孔熔解曲线的二阶导数曲线；然后根据二阶导数曲线和熔点峰位置，确定原始熔解曲线的初始重叠峰位置；再对初始重叠峰位置进行叠加拟合，生成两个熔点峰曲线；最后根据两个熔点峰曲线确定满足误差范围的目标熔点峰，并对目标熔点峰进行分离。该方法通过计算熔解曲线二阶导数曲线，降低了背景干扰、提高了熔点峰的分辨率，较好的解决了背景干扰较大情况下、具有重叠峰的疑难熔解曲线熔点峰只存在一个Tm值的问题。