本发明涉及医用创面材料修复领域，具体涉及一种猪皮脱细胞真皮基质支架的制备方法和应用。该方法包括：对猪皮用取皮鼓反取皮得到真皮基质层；对真皮基质层分别进行高渗盐脱表皮细胞、碱溶液进行脱真皮细胞、交联、匀浆研磨、醋酸凝胶化、化学交联、冷冻干燥定型。本发明的方法制备简单、脱细胞彻底最大程度地减少免疫原性物质、主要保留了胶原蛋白、弹性蛋白等有益细胞外基质成分，制备成的复合支架孔隙均匀规则、亲水性强、可快速血管化、具有良好的力学性能、良好的生物相容性与组织诱导能力。该材料可应用于内外科全层缺损及慢性创面的修复，作为外层敷料和内植入材料具有广阔的应用前景。