本发明公开了一种脱细胞真皮基质及其制备方法。该脱细胞真皮基质是将哺乳动物皮肤依次用氢氧化钠溶液和去污剂处理后得到的产品。其制备方法包括以下步骤：1)剥离哺乳动物体表皮肤；2)清除皮下附带成分；3)清洗皮肤；4)将皮肤用2－5N氢氧化钠溶液处理10－60分钟；5)置换新的2－5N氢氧化钠溶液，处理10－60分钟；6)重复步骤5)1－3次；7)将步骤6)经氢氧化钠溶液处理的皮肤用质量百分浓度为1－5％的去污剂进行处理；8)用去热原水对皮肤进行清洗，得到脱细胞真皮基质。本发明在医学领域具有较高的实际应用价值。