本发明公开了一种表面增强拉曼检测基底，涉及表面增强拉曼检测基底技术领域，包括柔性基底、固化树脂层、贵金属涂层以及金属氧化物薄膜；所述固化树脂层附着于所述柔性基底表面；在所述固化树脂层表面设置多级纳米结构层，所述多级纳米结构层由尺寸较大的一级纳米结构和尺寸较小的二级纳米结构组成；所述一级纳米结构固定在所述固化树脂层表面，形成凸起机构；所述二级纳米结构分布在所述一级纳米结构表面，本发明在柔性基底上制造有序多级纳米结构阵列，然后采用在多级纳米结构阵列表面沉积一层贵金属使其金属化，得到的表面增强拉曼检测基底，具有高精度、优异的稳定性，非常适用于单分子生物检测、疾病早期诊断等领域。