本发明公开了一种用于诱导神经细胞的导电反蛋白石薄膜及其制备方法和应用，导电反蛋白石薄膜的制备方法包括以下步骤：步骤一、制备纳米颗粒胶体晶体阵列模板，用水凝胶前体溶液填充模板空隙，固化后去除模板得到反蛋白石基底；步骤二、将得到的反蛋白石基底沿着与其单排孔洞直线方向的不同角度拉伸，得到具有各向异性椭圆多孔图案的反蛋白石薄膜；步骤三、配制导电水凝胶前聚体溶液，并用其填充具有各向异性椭圆多孔图案的反蛋白石薄膜，然后用紫外光固化，得到具有各向异性椭圆多孔图案的导电反蛋白石薄膜。本发明具有操作简便、成本较低、诱导效果良好等优点。