本发明涉及抗菌材料领域，具体涉及一种胍基透明质酸型抗菌水凝胶及其制备方法和应用。通过一系列反应，成功将不同链长的烷基胍通过化学键的方式连接到透明质酸羧基端侧链上，赋予透明质酸抗菌性能，然后使用二醇二缩水甘油醚类交联剂，通过开环聚合反应得到胍基透明质酸型抗菌水凝胶。本发明的胍基透明质酸型抗菌水凝胶还能够有效抑制细菌生长，防止伤口感染，是一种优良的抗菌凝胶辅料，对革兰氏阴性菌如大肠杆菌和革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌都表现出优异的抗菌性能；细胞相容性良好；反应条件易控制，成本较低，原料易得；可用于创面损伤的抗菌型敷料，具有良好应用前景。