本发明公开一种CD7‑CAR‑T细胞及其制备方法和应用，其中CD7‑CAR‑T细胞包含靶向CD7抗原的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段含有具有SEQ ID NO.12‑14所示氨基酸序列的抗原互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的重链可变区；和具有SEQ ID NO.15‑17所示氨基酸序列的抗原互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。本发明的抗体以及基于该抗体片段的CD7‑CAR与CD7抗原分子具有极强的亲和力，同时本发明的阻断分子几乎能完全阻断CD7分子在细胞表面的表达，而基本不会影响T细胞的正常扩增，从而能够有效避免CD7‑CAR‑T细胞的自相残杀。此外，本发明的CD7‑CAR‑T细胞对CD7阳性靶细胞具有显著且特异的杀伤作用，为细胞治疗临床应用提供了有益的CAR‑T细胞。