本发明是用茄尼醇含量为13％－17％烟叶浸膏为原料，碱液皂化后，以饱和烷烃萃取，萃取液减压回收溶剂后，将流浸膏进行一次分子蒸馏，蒸馏后茄尼醇溶解进行柱色谱分离，分段收集茄尼醇，将茄尼醇段脱溶二次分子蒸馏提纯后可获得纯度大于95％茄尼醇产品。该发明的工艺方法采用二次蒸馏，通过控制蒸发温度在不同的区间蒸发，可将与茄尼醇沸点差异较大的不同烟草成份高效分离，采用分子蒸馏技术和柱色谱分离技术相结合的方法达到了优势互补，避免了使用单一技术的缺陷，并且还具有使用溶剂少，成本低，安全性高，全过程自动化程度高的特点，在茄尼醇产品的工业化生产应用中具有较大的竞争优势。