本发明公开了一种提取高纯度茄尼醇的方法，利用超临界CO₂流体萃取和柱层析联合的高效分离纯化方法，以废次烟叶作为原料，提取高纯度茄尼醇。用以解决在高纯度茄尼醇提取过程中，普遍存在的纯度低、效率低、成本高、环境污染大等问题。经过预处理的烟叶采用夹带剂强化技术，经过超临界CO₂流体一级萃取，同时通过二级分离，使得超临界CO₂流体的萃取物选择性地析出在两个不同的萃取釜中，实现了茄尼醇富集和萃取物的初次分离。茄尼醇粗膏在NaOH的醇溶液中皂化处理后采用柱层析进一步纯化，减压浓缩富集茄尼醇的洗脱液，其浓缩液经过冷冻结晶和真空干燥处理，茄尼醇纯度可达到95％以上。