本发明涉及一种微生物取种划线装置及方法，属于微生物检测技术领域，该装置包括机架，所述机架上设有取种器连接件，所述取种器连接件能够在机架上做三维运动，所述取种器连接件上设有装载头，装载头与取种器连接件转动连接，在所述取种器连接件的下方设有工作台，所述工作台上设有存储盒和旋转台，存储盒上放置若干个取种器，在所述旋转台上安装培养皿。该装置能够替代人工实现取种划线，避免了人工取种划线过程人与微生物的接触，防止对人造成危害，环境污染，降低了外界环境对纯化过程的干扰。