本发明提供了一种热镀锌钢板透射电镜测试样品的制备方法，具体包括：在热浸镀锌超高强钢板上通过切割得到可放入双束系统样品观察室的试样；使用双束型聚焦离子束设备进行待取样区域的选取和沉积金属保护；用聚焦离子束在待取样品周围挖坑并用纳米机器手取出样品，将样品转移至金属支架并在样品底部的金属支架处加工出三条支撑柱，每相邻两根支撑柱之间划分出一块待切割区域，并用离子束进行切割去除；再次在样品二表面沉积保护金属，之后对剩下的两块样品区域分别进行离子减薄。本发明提供的方法，能够保证热浸镀锌钢板截面透射样品的连续性和完整性，而且能够一次获得具有超长观测视距的两个对比透射样品，提高了透射样品制备的效率和成功率。