本发明涉及一种高密度酵母发酵液的制备方法，将玉米豆粕水调浆，分别加入高温淀粉酶、糖化酶、酸性蛋白彻底酶解后，固液分离得固形物湿渣和稀复合营养液。将一部分稀复合营养液稀释后接入酵母菌种子液进行培养，剩余稀复合营养液经减压蒸发获得浓缩液。培养过程中通过流加浓缩复合营养液和营养盐的方式控制充足的溶解氧，当酵母密度为最大时，停止流加，待发酵性糖消耗殆尽后得酵母发酵液，静置得高密度酵母菌液。本发明经过不同酶制剂酶解成酵母生长需要的糖和氨基酸，通过连续流加发酵分批出料的方式，获得高密度的酵母液，不仅酵母含量提高，发酵灭菌蒸汽用量小，生产用水少，减少发酵罐洗罐废水排放量，达到节能降耗和清洁生产的效果。